PROTOCOLO PARA PURIFICAÇÃO DE VESÍCULAS EXTRACELULARES DE BACTÉRIAS DE INTERESSE NO CONTROLE BIOLÓGICO DE INSETOS PRAGA DA SOJA
Palavras-chave:
Vesículas extracelulares bacterianas, Bioinseticida, Chromobacterium subtsugae, Bacillus thuringiensisResumo
Para mitigar os danos do percevejo-marrom (Euschistus heros) na soja, este estudo avaliou um protocolo de isolamento e purificação de vesículas extracelulares bacterianas (bEVs) de Chromobacterium subtsugae e Bacillus thuringiensis var. kurstaki. Sobrenadantes de cultivos em biorreator foram submetidos a clarificação, ultrafiltração e cromatografia de exclusão por tamanho (SEC), sendo caracterizados por TRPS, nanocitometria, microscopia eletrônica de transmissão (MET), SDS-PAGE e proteômica label-free. A SEC promoveu a separação efetiva das bEVs em relação às proteínas solúveis. As bEVs obtidas exibiram diâmetros médios similares (~132 nm e ~139 nm) e altas concentrações (~2,8 × 10¹² partículas/mL). Nanocitometria e MET confirmaram a integridade membranar, morfologia típica e estabilidade das partículas. As análises por SDS-PAGE e proteômica comprovaram perfis moleculares distintos entre as frações. O protocolo multinível mostrou-se eficaz, reprodutível e robusto, fornecendo uma base promissora para o controle biológico de E. heros.
Referências
Cimi, M. E., Ribeiro, D. G., Nascimento, Y. O., Reis, M. C. G. dos, Ribeiro, B. B. da S., Freitas, E. L. de, Sales, R. M. M., Lessa, C. C., Costa, R. A. da, Castro, M. T. de, Radicchi, M. A., Bao, S. N., Fontes, W., Pereira, R. W., Pontes, R. G. M. S. de, Felipe, M. S. S., & Oliveira, G. P. de. (2026). Bacterial extracellular vesicles from Chromobacterium subtsugae and Bacillus thuringiensis as cell-free bioinsecticidal nanocarriers against the soybean pest Euschistus heros. bioRxiv. https://doi.org/10.64898/2026.08.07.743497
Martin, P. A. W., Gundersen-Rindal, D., Blackburn, M., & Buyer, J. (2007). Chromobacterium subtsugae sp. nov., a betaproteobacterium toxic to Colorado potato beetle and other insect pests. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 57(5), 993–999. https://doi.org/10.1099/ijs.0.64611-0
Veerman, R. E., Teeuwen, L., Czarnewski, P., Güclüler Akpinar, G., Sandberg, A. S., Cao, X., Pernemalm, M., Orre, L. M., Gabrielsson, S., & Eldh, M. (2021). Molecular evaluation of five different isolation methods for extracellular vesicles reveals different clinical applicability and subcellular origin. Journal of Extracellular Vesicles, 10(9), e12128. https://doi.org/10.1002/jev2.12128
Witwer, K. W., Buzás, E. I., Bemis, L. T., Bora, A., Lässer, C., Lötvall, J., Nolte-'t Hoen, E. N. M., Piper, M. G., Sivaraman, S., Skog, J., Théry, C., Wauben, M. H. M., & Hochberg, F. (2013). Standardization of sample collection, isolation and analysis methods in extracellular vesicle research. Journal of Extracellular Vesicles, 2(1), 20360. https://doi.org/10.3402/jev.v2i0.20360
Zhang, Y., Li, X., Tian, H., An, B., Yan, B., & Cai, J. (2022). Vegetative insecticidal protein Vip3Aa is transported via membrane vesicles in Bacillus thuringiensis BMB171. Toxins, 14(7), 480. https://doi.org/10.3390/toxins14070480
